Applied Biosystems实时荧光定量PCR仪
StepOne Plus快速实时荧光定量PCR仪
StepOne Plus实时荧光定量PCR仪是Applied Biosystems首款采用触摸屏控制、VeriFlex温度梯度控制模块的qPCR，支持快速PCR反应和四重荧光定量分析。本栏目提供其配置及OQ/IQ服务套餐方案。
设备名称：实时荧光定量PCR仪 qPCR仪 real-time PCR system
制 造 商：美国Thermo Fisher公司 产地：新加坡
品 牌：Applied Biosystems（AB）
型 号：StepOne（48×0.1mL）
StepOne Plus（96×0.1mL）
技术详情：见［技术规格］
商品报价：见［订货指南］
主要功能用途
StepOne Plus系列实时荧光定量PCR仪是Applied Biosystems第一款采用触摸屏操作控制、引入VeriFlex温度梯度控制模块的qPCR平台。可实现在同一次实验中分别设置6组不同引物退火温度以确立最佳扩增条件，升温速度快可支持快速PCR反应（StepOne不适用）。采用4组荧光检测通道（StepOne为3通道），可实现多重荧光定量分析检测。
主要应用包括：
1、基因表达分析
动植物和微生物在生理病理、环境及外来胁迫下相关基因表达的变化分析以及SiRNA诱导基因沉默和基因敲除后特定基因表达水平的检测。
2、miRNA表达水平的检测
基于miRNA与特定靶基因mRNA表达水平变化间的关联，研究miRNA 调控基因表达机制。
3、基因分型（SNP genotyping，Genotyping）
利用TaqMan探针、饱和DNA染料HRM曲线分析进行基因分型，得出等位基因频率、基因型占总基因型比率等。可应用于如遗传病诊断，SNP基因分型，药物代谢酶DME基因分型，法医遗传学鉴定等。
4、拷贝数变异(CNV)
拷贝数变异(Copy number variation, CNV)是指因基因组发生重排而导致长度1KB以上的基因片段的缺失（减少）、插入、重复（增加）、重排、倒 位、DNA 拷贝数目变化，也称为拷贝数多态性(copy number polymorphisms, CNPs）。是造成物种个体差异和人类许多疾病（如癌症、遗传性疾病、心血管疾病）的一种重要遗传基础。荧光实时定量PCR检测初始样品的某个DNA 片段的拷贝数进行定量，用已知拷贝数为2的DNA内参校正而实现对目DNA 片段拷贝数的确认。
5、高分辨率溶解曲线分析（High resolution melt， HRM）
DNA序列长度、GC 含量及碱基互补性差异影响DNA双链结构的热稳定性。高分辨熔解曲线(high-resolution melt，HRM) 分析是通过实时监测升温过程中与双链DNA特异性结合的荧光染料释放的绿色荧光强度的变化，了解PCR 产物中DNA分子的解链温度情况，分析样品特定基因片段DNA组成变化。实时荧光定量PCR实验运行程序中引入溶解曲线分析环节后，可借助于专用HRM分析模块完成HRM分析。HRM用于突变扫描和基因分型，不受突变碱基位点和种类限制，既可对未知突变进行筛查、扫描，又能对已知突变进行分析，还可用于STR分析。
6、病原体检测（Pathogen detection）
实时荧光定量PCR仪能可靠用于临床医学人体上呼吸道的感染、肺炎、消化道感染、中枢神经系统等疾病，以及畜牧业、农作物病虫害的病原体的检测确认、感染严重程度的量化评估。
7、蛋白热稳定性分析（Protein thermal shift）
利用实时定量PCR仪来分析热稳定性，进行配体-蛋白结合的高通量筛选，突变或修饰对蛋白热稳定性的影响
使用蛋白结合染料（如Protein Thermal Shift 染料），实时定量PCR系统上运行实时熔解实验，根据因蛋白熔解导致荧光图像差异，分析配体与蛋白的结合稳定性。可用于以高通量筛选配体与蛋白的结合， 筛选能与蛋白靶点结合的小分子和片段文库候选药物、抗体，鉴定最佳缓冲液条件以改善蛋白的纯化和分离等。
8、食品安全和GMO(genetically modified organism)检测
实时荧光定量PCR技术用于食品的微生物污染监测、肉食类食品食材来源和组成的检验、如转基因动植物基因的检测等。
9、耐药基因检测等
性能特点
StepOne Plus实时荧光定量PCR仪具有直观简便的操作界面和的实验设置向导，既可以通过彩色触摸屏操作，也可与PC联机采用StepOne Software进行实验操作和数据分析处理。精确温控反应模块及先进光学检测单元，支持广泛的研究和检测应用。
1、功能强大、操作简便的StepOne软件
PCR实验步骤实验设计向导，引导用户执行实验的各个步骤，包括样本和反应设置、热循环和荧光检测等。高级设置适用于进行更复杂应用(如多重反应)的高级用户；
实时监视扩增增长曲线，即时查看实验进程；
还可通过一台远程计算机实时查看扩增实验进程，并在运行完成时通过电子邮件提醒通知；
自动基线和白动阈值功能令数据分析得以简化；
自动单核苷酸多态性基因分型识别功能，具有直观的图表输出和量值分配特性；
当查看扩增曲线或单核苷酸多态性基因分型图谱时，易于识别样本反应孔；
StepOne软件支持包括标准曲线绝对定量、比较Ct(ΔΔCt)相对定量、等位基因鉴别（SNP Genotyping)、阳性/阴性等多种分析方法；
StepOne Software软件集成高分辨率熔解曲线(High Resolution Melt/HRM)应用模块。HRM 软件改进聚类算法，提高了灵敏度和准确性，并能够对单个板上运行的多个检测进行单独分析。
还可选择符合MIQE 标准的实时荧光定量PCR数据标记语言(RDML)格式输出实验数据
2、VeriFlex 梯度控温技术
StepOne Plus的96孔反应模块采用Veriflex梯度温控技术，具有六个独立的温度区，可实现精准的温度控制和优化。
3、多重实时定量分析功能
具有最多可支持4个靶标的多重实时荧光定量检测功能。
主要技术规格
Applied Biosystems提供的StepOne系列实时荧光定量PCR仪分为StepOne Plus、StepOne两款。二者的样品反应模块、荧光检测通道数量均存在一定差异。
型号 | StepOne Plus（4荧光通道） | StepOne（3荧光通道） |
样品通量 | 96孔×0.1 mL | 48孔×0.1 mL |
支持的耗材 | 0.1mL 96孔反应板与光学盖膜 0.1 mL96孔反应板与光学平盖 0.1 mL 8连管与光学平盖 0.1 mL单管与光学平盖 | 0.1mL 48孔反应板与光学盖膜 0.1 mL 48孔反应板与光学平盖 0.1 mL 8连管与光学平盖 0.1 mL单管与光学平盖 |
反应体积 | 10～30μL | |
热循环控温类型 | Peltier-Based System | |
温度梯度分区功能 | 6个可独立控制的温控区域 | - |
最大模块变温速率 | 6.5℃/秒 | 4.6℃/秒 |
最大样品变温速率 | 快速模式2.2℃/秒； 标准模式1.6℃/秒 | |
温度准确度 | ±0.25℃ (35℃至95℃范围时钟启动后3分钟开始测量) | |
温度均一性 | ±0.4℃(35℃至95℃范围时钟启动后30秒测量) | |
PCR完成运行时间 | <30分钟运行 | <40分钟运行 |
光学检测性能 | ||
激发光源 | OptiFlex Blue LED光源 | LED |
激发/检测波长范围 | 450–600 nm/500–640 nm | |
荧光检测通道 | 4个荧光通道 | 3个荧光通道 |
荧光激发波长 | 4组激发滤光片 CH1：470±15nm CH2：520±10nm CH3：550±10nm CH4：580±10nm | 3组激发滤光片 CH1：470±15nm CH2：520±10nm CH3：580±10nm |
荧光检测波长 | 4组发射滤光片 CH1：520±15nm/适用于FAM/SYBR Green(预校准)；SYT09 CH2：558±12nm/适用于VIC/ JOE (预校准)；HEX, TET CH3：587±10nm/适用于NED/TAMRA /ABY (预校准)；Cy3 CH4：623±14nm/适用于JUN/ROX(预校准)；Texas Red | 4组发射滤光片 CH1：520±15nm/适用于FAM/SYBR Green(预校准)；SYT09 CH2：558±12nm/适用于VIC/ JOE (预校准)；HEX, TET CH3：623±14nm/适用于JUN/ROX(预校准)；Texas Red |
多重分析能力 | 最多4个靶点 | 最多3个靶点 |
动态范围 | 9个数量级的线性动态范围 | |
灵敏度 | TaqMan单一报告基因分析30µL体系中检测1拷贝RNaseP模板 | |
精密度 | 分辩5000至10000个RNaseP模板拷贝(置信度997％) | |
运行时间 | 快速PCR模式：完成40个循环的反应＜40分钟 标准PCR模式：完成40个循环的反应＜2小时 | |
安装运行条件
StepOne Plus实时荧光定量PCR仪在海拔2km以下使用
工作环境温度：15℃ ~ 30℃（推荐）
工作电源：100-240V/50-60Hz/10A；960 W
相对湿度范围：15 ~ 80%R.H.
主机重量：23.6 kg
外观尺寸尺寸（W×D×H）：270×500×400 mm
组成配置
Applied Biosystems StepOne Plus实时荧光定量PCR仪由定量PCR仪主机、外置电脑工作站、PCR Starter Kit和随机软件包（StepOne Real-Time PCR System Software、Primer Express Software)等组成。
主机标准附件包括电源电缆（power Cable）、USB数据线（StepOne system Cable）、网线（Ethernet cable）和USB drive（含电子文档）。
Applied Biosystems 提供了HRM分析软件和SEA审计管理软件可供选择。
选配USB接口的无线网卡，便于将实验数据联网传输。
品名 | 品牌 | 货号 | 规格 | 中文描述 | 单价 |
HRM分析功能软件 | Applied Biosystems | 4486395 | Each | HRM Software Module for QuantStudio 6 and 7 Systems | 询价 询价 |
21CFR Part11审计管理软件 | Applied Biosystems | 4486400 | Each | 21CFR Part11 Software Module For QuantStudio 6 and 7 Systems | 询价 询价 |
WiFi网络模块 | Applied Biosystems | A26774 | each | High-Power USB Wi-Fi Module, Maximum speed up to 300 Mbps. Use with SimpliAmp ProFlex, QuantStudio 1/3/5. | 询价 |
基本耗材
StepOne Plus、StepOne两款实时荧光定量PCR仪分别配置的是96×0.1 mL、48×0.1 mL的快速反应模块。适用于快速荧光定量PCR管、PCR联排管或PCR板。
为使得反应管、反应板与反应模块的紧密贴合、热传导效率均匀一致，建议采用通过Applied Biosystems仪器兼容性测试的 MicroAmp系列，以确保获得精确、可重复的PCR实验结果。
品名 | 品牌 | 货号 | 规格 | 描述 | 报价 |
96孔快速荧光定量PCR板 | Applied Biosystems | 4346907 | 10板/盒 | MicroAmp EnduraPlate Fast Optical 96-Well Reaction Plate, 0.1 mL | 询价 |
快速荧光定量PCR板 彩色组合装 | Applied Biosystems | 4483493 | 5板/盒 | MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast Multicolor Reaction Plates with Barcode | 询价 |
定量PCR 8联平盖 | Applied Biosystems | 4323032 | 300条/盒 | MicroAmp Optical 8-Cap Strips，Flat , Clear | 询价 |
快速荧光定量PCR单管 | Applied Biosystems | 4358297 | 1000 支/盒 | MicroAmp Fast Reaction Tube with Flat Cap, Clear, 0.1 mL | 询价 |
定量PCR封板膜 | Applied Biosystems | 4360954 | 25张/盒 | MicroAmp Optical Adhesive Film | 询价 |
48孔快速荧光定量PCR板 | Applied Biosystems | 4375816 | 20板/盒 | MicroAmp Fast Optical 48-Well Plate | 询价 |
48孔定量PCR板封膜 | Applied Biosystems | 4375928 | 25张/盒 | MicroAmp 48-Well Optical Adhesive Film | 询价 |
订货指南
Applied Biosystems StepOne Plus系列实时荧光定量PCR仪提供无电脑工作站、带台式电脑或便携式电脑工作站三种配置套装。电脑工作站预装有StepOne Software、Primer Express Software应用软件。
序号 | 品名 | 货号 | 套装配置描述 | 报价 |
1-1 | Stepone Plus 实时荧光定量PCR仪 | 4376600 | Applied Biosystems StepOne Plus Real-Time PCR System Includes： StepOne Plus qPCR instrument with 96-well Fast VetiFlex Block StepOne Plus Starter Kit | 询价 询价 |
1-2 | StepOnePlus实时荧光定量PCR 工作套装 | 4376599 | Applied Biosystems StepOne Plus Real-time PCR Systems Includes： Stepone Plus qPCR System (4376600) Dell tower computer | 询价 询价 |
1-3 | StepOnePlus实时荧光定量PCR 工作套装 | 4376598 | Applied Biosystems StepOnePlus Real-time PCR Systems Includes： Stepone Plus qPCR System (4376600) Dell laptop computer | 询价 询价 |
2-1 | Stepone实时荧光定量PCR仪 | 4376357 | Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System Includes： StepOne qPCR instrument with 48×0.1mL Block StepOne Plus Starter Kit | 询价 询价 |
2-2 | StepOne实时荧光定量PCR 工作套装 | 4376374 | Applied Biosystems StepOne Real-time PCR Systems Includes： Stepone qPCR System (4376357) Dell tower computer | 询价 询价 |
2-3 | StepOne实时荧光定量PCR 工作套装 | 4376373 | Applied Biosystems StepOne Real-time PCR Systems Includes： Stepone qPCR System (4376357) Dell laptop computer | 询价 询价 |
对于有GLP、FDA、CFDA管理合规要求的实验，Applied Biosystems为StepOne、StepOne Plus实时荧光定量PCR仪提供了专门的2Q验证服务套餐。
序号 | 品名 | 货号 | 套装配置描述 | 报价 |
3-1 | StepOne IQ/OQ服务套餐 | 4413678 | IQ/OQ,SVC StepOne | 询价 |
3-2 | StepOne Plus IQ/OQ服务套餐 | 4415138 | IQ/OQ,SVC StepOne Plus | 询价 |
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