刮板-滚筒-加压垫让PCR封板操作事半功倍

成大业若烹小鲜-2

      《联排管盖操作工具在PCR实验中应用价值浅析》阐释了PCR实验反应孔密封的重要性。在PCR/qPCR运行前严密封板，可防止PCR板孔内液体蒸发、降低实验误差并减少孔与孔之间的交叉污染。

      粘性密封膜是一面敷有压力敏感型胶粘剂（pressure sensitive adhesive，简称压敏胶）的透明膜。揭去衬膜后，用手指或滚轮等辅助工具施压，可使压敏剂流动并粘附可接触到的光洁表面。粘贴中施加足够的压力对于良好密封至关重要。因此，在推挤封膜胶粘剂背面的同时，要对向下施加适度的压力（至少达到每平方厘米1公斤压强），以便胶在密封工作表面均匀敷布，使膜、板贴合紧密。

      PCR板密封膜法操作中，使用必要工具协助，可确保反应孔牢固密封。为此，我们对几款常用PCR板密封工具加以总结。

一、封板膜刮板

      Adhesive Seal Applicator or Adhesive Film Applicator，即粘性密封膜刮板或封板膜刮板。顾名思义，就是用刮板在PCR板面上前后、左右推挤和刮擦封膜，使密封膜平整、全面覆盖所有反应孔。

      与常见的磁卡、门禁卡比，封板膜刮板的边缘更厚实和圆滑，避免锐利边角划破密封膜。为方便戴手套时操作，刮板的一侧或中央加厚，往往还设有水平纹路或圆滑突起，便于握紧、并在刮擦过程中向下对膜施加压力。

          封板膜刮板(4333183)                   封板膜刮板(AB1391)              Adhesive Seal Applicator(4ti-0503)

使用刮板密封PCR板的操作步骤为：

      1）手持刮板并稍微用力向下压板，沿着PCR板长边往复刮密封膜背面，使封板膜与反应板朝上一面贴合；

      2）PCR板旋转90°，用相同方法沿着PCR板短边刮膜；

      3）竖起刮板，用刮板的一边或一角，沿着PCR板反应孔阵列四周，紧贴其边缘压紧封板膜。

刮蹭长边                            刮蹭短边                             压实外围

       4）竖起刮板，在所有反应孔之间缝隙，逐行、逐列用刮板推压，确保膜完全包裹反应孔开口及周边板面。

      刮板使用灵活，对各种PCR板型都具有很强的适应性，常被PCR封板膜厂家选作配套附件。赛默飞旗下除Miniamp、Miniamp Plus以及GeneAmp2700、9700等少数机型外，封板膜刮板作为包括Simpliamp、Veriti、VeritPro、ProFlex PCR仪以及Steopne Plus、QuantStudio 1/3/5、7300/7500/7500 Fast荧光定量PCR系统启动工具套件的必备组件随机提供。

二、封板膜滚筒

      Film Sealing Roller or Adhesive Seal Roller，即胶粘密封滚筒或封板滚筒。

      滚筒采用刚性手柄便于施力，而中等硬度橡胶材质滚轮，更适应PCR反应板表面的凹凸，不损伤封板膜。

      Adhesive Seal Roller                             Film Sealing Roller（MSR0001）                    Sealing Film Roller   

      将封板膜工作面与PCR对齐并覆盖全板，用滚筒前后左右来回往复碾压几遍，可将膜紧密贴牢在 PCR板上，确保96/384孔板上每个孔都被均匀、严实密封。

      从工作原理可知，滚筒最适于无突起边缘且反应孔开孔高度与板面大致平齐型的24孔、32孔、48孔、96孔、384孔PCR板。 

三、96孔封板膜压垫

      Optical Film Compression Pads or Optical Compression Film Sealing Pad，即光学封膜压垫或光学封板压垫，由一层软硅泡沫垫夹心层与具有优良热稳定型PTFE（Teflon）表层加工而成的薄板。

      板上有96个开孔，孔大小、位置与PCR板反应孔一一对齐，反应管内的光学信号可从反应孔内射出和被检测，特别适合实时荧光定量PCR仪使用。

      将压垫开孔与PCR板所有反应孔对齐后，按压垫板，可使密封膜与PCR板面、各反应孔360°均匀紧密贴合，确保安全密封。

      光学封膜压垫一次完成96个反应孔密封，操作简便、高效，可替代封板刮板、封板滚筒用于荧光定量PCR板封板。

      光学封板压垫常与光学透明密封膜组成光学封板膜套件（MicroAmp Optical Adhesive Film Kit, 4313663），作为PCR启动工具包组件随赛默飞9700，2720 PCR仪和7900HT, QuantStudio ,ViiA 7实时荧光定量PCR仪提供。

       伯乐则将光学封板压垫（ADR3296）搭配Microseal B封板膜组成光学PCR封板套装（Optical Film Sealing Kit）用作DNA Engine Opticon 2和Chromo4荧光定量PCR仪的标准附件。 

4、PCR样品管架

      赛默飞的96-Well Support Base 或伯乐的96-place rack，即PCR样品基座，又称PCR管架，可在光滑实验台面稳妥有效支持和固定PCR管、联排管和PCR反应板。

      在PCR板封板操作中，将PCR板安置于基座上，防止在使用滚筒和刮板推压操作中反应板位置移动，影响封板效果。因此，在封板膜密封操作中，无论是使用封板膜滚筒、封板膜刮板还是96孔板，常建议将 PCR反应板放置在PCR样品基座上或循环仪样品基座中进行，确属良心建议。

参考文献

How to Use MicroAmp Reaction Plates,Tube-Strips and Tubes, Rev. A