• 注册 / 登录
  • 首页
  • 产品中心
  • 百家论坛
  • 资讯动态
  • 关于我们
  • 法律声明
    首页 > 百家论坛 > 百家秘籍

百家论坛更多分类

  • 产品课堂
  • 百家秘籍
  • 操作规程

产品推荐

  • Optima XPN-100/XPN-90/XPN-80智能超速离心机

    eXpert支持|GMP管理

  • MD SpectraMax iD5多功能荧光测定仪

    FI/FP/TRF/HTRF|DLR/ABS/核酸定量

  • 伯乐ChemiDoc MP Western荧光成像分析仪

    WB荧光/ECL印迹|凝胶成像

  • Sable Promethion Core小动物代谢行为表型分析系统

    能量代谢呼吸熵测定|跑轮/跑步机/自主活动监测

  • 伯乐CFX Duet实时荧光定量PCR仪

    96×0.2mL Low-profile|双色荧光/快速PCR

  • NanoDrop OneC超微量紫外可见分光光度计

    One C酶动力学测试|One核酸蛋白测定

  • Optima XE-100/90超速离心机SW 41 Ti甩平转头

    6×13.2mL|41000rpm

  • JLA-12.500/JLA-10.500角转头适配500mL离心瓶

    6×500mL|12000rpm

  • 伯乐Mini-Protean Tetra蛋白垂直电泳槽灌胶架和夹胶框

    Mini-P Tetra蛋白电泳槽灌胶配件|灌胶架/密封胶垫

  • 伯乐Mini-Protean Tetra蛋白电泳槽

    8.3×7.3cm小型凝胶|配置方案

百家秘籍

生物医学样品微量紫外光度测定的技术原理和方法-上

       分子生物学实验样品用量少,核酸蛋白提取的产量有限。不要说标准石英比色皿(Cuvettes)最低测试样品体积(Min. Volume)0.5mL、半微量比色皿(Semi-Microcell)动辄0.10 - 0.25mL,即便是50 μL微量比色皿(Microcell),上样体积也达到50 μL。对于常规10-25μL的PCR反应体系,这样的核酸样品耗费,显然太过豪奢。撇开标准10mm光程最高检测浓度上限较低不谈,对低丰度样品稀释至50 μL后,很可能超出标准10mm光程紫外吸光度最佳测试范围,测试准确性难以保障。因此,核酸蛋白测定体积的微量化成为分子生物实验的时代刚需。

       纵观国内外众多微量紫外可见光度计产品的技术特点,不难发现,在探索和实现样品紫外微量化测定的风尘中,依稀可见5个用自己方式追逐梦想的身影。

一、Eppendorf BioPhotometer生物分光光度计

       1998年,随着PCR实验日渐普及和实时荧光定量PCR商业化应用,Eppendorf将从常规综合型紫外可见分光光度计中的核酸、蛋白及细胞测定等有关功能方法加以整合,率先推出了BioPhotometer生物分光光度计。                                              

BioPhotometer生物分光光度计.jpg

       BioPhotometer对核酸蛋白按测定任务分门别类予以细化、模块化,并在仪器控制面板设置专门功能键。譬如核酸测定工作,面板上设置了dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo四个快捷功能按键。蛋白测定直接细分为Protein 280nm、Bradford、BCA、Lowry法。实现了测定任务的一键直达。
        不仅如此,系统已预置了每项应用程序的测试参数和条件,无需常规紫外应用软件复杂层叠菜单操作和设置,使得测试数据规范化,减少人为设置失误。如双链DNA样品测定,系统自动完成A260 nm以及额外的A230, A280和A340 nm共4个吸光度指标测定报告,同时自动显示样品浓度测定结果以及A260/280、A260/A230两项核酸纯度比值。
       BioPhotometer生物分光光度计的创造性设计,真不愧是同类仪器的开发者、实验研究人员的“导师”。

      Eppendorf在生物样品测定技术领域的另一个创新,是开发出测试波长范围220 -1600nm的紫外可见通用型双光程UVette比色皿。

紫外吸光度检测基本原理(Lambert-Beer定律).jpg

       按照朗珀-比尔(Lambert-Beer)定律基本原理:同种物质样品溶液,浓度越高,Ia值越大;相同浓度样品,测试光程b越大,Ia值越大;压缩测试光程,Ia值减少。

       UVette为精巧的漏斗造型设计:底部为长10mm×宽2mm×高2mm的狭长形微量样品槽(容积50μL),中部为漏斗部(总容积500μL),上部为正常比色皿形状(总容积1mL)。

BioPhotometer生物分光光度计UVette比色皿.jpg

       采用两种光程设计,既可以沿着底部狭槽的10mm的长轴方向检测,也可以将UVette旋转90°使光束沿着2 mm短轴方向检测。其优势在于:普通浓度范围的样品使用10 mm光程测定;高浓度样品,用2mm短光程检测,通过软件算法自动归一化处理转换为10mm测试值。

       实测中,约200mg临床肥胖症患者来源的脂肪组织提取总RNA(产量20-60μg),分别溶于30-50μL 含DEPC去离子水中制成原液。取1μL RNA原液用DEPC水按1:75比例稀释后,移入Uvette,在Biophotometer分光光度计上进行A260测定。实时荧光定量PCR反应结果表明,UVette微量比色皿测定性能满足qPCR实验的总RNA样品测定量要求。

 

二、日立UH5300紫外可见分光光度计

       标准光程比色皿,底面为10mm×10mm正方形,测试光束从比色皿正面距离底面8.5mm高度的中心位置垂直入射,光束中轴位置对应的样品体积为0.85μL,样品体积须大于此容积方可进行正常检测。由于液面存在一定弧度的向下凹陷,为确保液面中心(最低处)位置高于测试光束,故实际测试样品体积不少于1mL。

       要减少样品体积,只能以测试光束在比色皿后壁的出射点为中心,X、Y、Z三个方向上同时缩减液体所占空间。

       测算表明,2mm宽×2 mm深×1 mm厚的液样,容积为4μL。只有当测试光束形成横切面直径1.0mm的圆形光斑或边长1.0mm×1.0mm正方形(对角线为1.44mm),才能实现最低1.5μL样品完整包绕测试光束。

       世上无难事,只怕有心人。

       日立公司2013年上市的UH5300,就提供了一款痕量样品池(trace sample cell)。该样品池的光程仅1mm,可用于1.5 - 4μL样品的测定。

       资料显示,UH5300微量比色皿解决方案具有代表性:垫高微量检测池架的位置,样品溶液层厚度压缩到1mm(压缩了光程,可通过软件算法校正为标准10mm光程的校正值)。

       考虑到加工难度和移液器加样的可行性,1.5μL液量很可能已是这类比色皿款式样品池容积的下限。

UH5300紫外可见分光光度计微量样品测试模块.jpg

       该检测池须与池架底座(holder base,用于垫高检测池架,使池内液体的中心抬高与测试光束的中轴重合)、检测池架 (single cell holder,比色皿架)和比色皿遮光罩(cell mask)一起使用。除非UH5300主要用于生物学微量样品的测定,否则微量测定模块与其他常量应用测试模块的更换,要耗费功夫。

       此外,每个样品测试前,样品池都需经自来水冲洗、去离子水冲洗、甩干或风干后使用,操作之繁琐,不言而喻。

 

三、AlphaSpec μL微量分光光度

       0.5-2.5μL量程移液器被常用于PCR实验中模板、引物的精密移取操作。

或许受此启发,原美国Alpha Innotech公司于2008年开发出了AlphaSpec μL微量紫外可见光度计(已停产)。它不用比色杯、毛细管,也无需将样品滴加到检测器表面。关键在AlphaSpec采用透射紫外的聚合物材料、结构特殊设计的AlphaUV移液吸头。

       这种吸头上部与吉尔森P10移液器吸头完全一致,但接触样品的底部为类似USB接口的长方体扁管(内腔厚度1mm,相当于1mm光程,有效容积2.5μL)。液体控制与常规移液器操作完全一致。

       检测光束可以垂直穿透吸头薄壁检测样品。操作时,移液器装上AlphaUV吸头后插如特制的检测器接口,2秒钟测试完成后,取下移液器并更换一新吸头,可立即进行下一个样品测定。无须清洁测试端口样品残留,操作简便、高效。因此,特别AlphaSpec适合于样品量极其有限,希望完成测试后可以回收样品的研究工作。

蜂蜜浏览器_AlphaSpec 微量紫外可见光度计.jpg

 (待续)

上一篇:蛋白提取纯化的几种常用方法

下一篇:立式超低温冰箱特殊定制型冻存架

阿拉斯加科技(北京)有限公司

依托于雄厚技术和服务背景、一流经营管理理念,一直专注于国内外领先的实验仪器、设备专用配件耗材及生物信息软件的引进和推广,为生命科学研究实验用户提供专业、可靠、便捷的服务。

了解更多 >>

产品中心

  • 分子生物仪器
  • 蛋白分析仪器
  • 细胞生物仪器
  • 微生物学仪器
  • 动物实验仪器
  • 低温保存设备
  • 样品前处理仪器
  • 仪器配件工具
  • 分析仪器
  • 小型实验工具
  • 仪器专属耗材
  • 仪器应用软件
  • 更多 >>

联系我们

注册地址:北京市海淀区上地东路1号院1号楼401

客服电话:010-62420076  13366661276 (工作日 8:00~18:00)

周六客服:13366661276 (9:00~18:00)

微信客服:(周一至六 8:00~18:00)(扫码右上角)

投诉及意见:xyq@alifescience.com

关注公众号

版权所有:阿拉斯加科技(北京)有限公司      公安备案图标.jpg 京公网安备11010802031896号     京ICP备19059337号-1   


京公网安备 11010802031896号

Design By:LOGO.VIP

关于我们| 合作品牌| 法律声明

  • 咨询热线

    13366661276

  • 在线QQ

  • 关注我们

  • 返回顶部