大肠杆菌质粒DNA的提取纯化方案

质粒是独立于染色体的环状DNA分子。在分子生物学中，他们被用作运送分子，或称载体，用于承载特定的DNA片段。

利用细菌来复制质粒，可以大规模生产目的DNA。从细菌中获得质粒的方法称为质粒纯化。

质粒纯化是将质粒DNA与基因组DNA、蛋白质、核糖体以及细菌细胞壁分离开的一种技术。

质粒纯化包括三个基本步骤：细菌的培养，细菌的收集和裂解，质粒DNA的纯化。

实验材料：含质粒的大肠杆菌

试剂、试剂盒：葡萄糖 EDTA Tris-HCl NaOH SDS KAc 异戊醇

仪器、耗材： 台式高速离心机 、 恒温振荡摇床  、高压灭菌锅  、振荡器 、 微量移液器 、 1.5ml离心管 （点击蓝色字体可查看相关产品）

实验步骤

纯化完成后，有许多方法可用来检验质粒的纯度，以确认质粒没有被基因组DNA污染并且没有在细菌内被修饰。

分光光度计可以通过比较在不同波长条件下的吸光度来测定质粒DNA的浓度。（点击蓝色字体可查看相关产品）

琼脂糖凝胶电泳也可用来分析质粒DNA的大小是否正确或者是否有杂质。（点击蓝色字体可查看相关产品）

应用和改动

对于不同的质粒大小、拷贝数、和培养体积，可相应改动该质粒纯化过程，包括使用不同的结合，清洗和洗脱设备。其中最主要的区分标准是质粒产量，它将质粒制备划分为微量提取，中量提取，大量提取和超量提取。

关于下游的应用，质粒纯化后通常会被用于一种叫做转染的技术，它是将质粒DNA转入到真核细胞当中。多数时候，转染的目的是利用报告蛋白来观察细胞或组织的结构。

有时，分别纯化的多个质粒会被转入到同一细菌当中，这些质粒编码几种酶，从而在细菌中再造形成一个完整的生物合成途径。最终结果是合成一种复杂的化合物，例如抗生素。

纯化的质粒也可能用来重新转化细菌，用于大量生产该质粒编码的蛋白质。然后结晶纯化的蛋白来进行结构分析。

参考资料：

《医学生物化学与分子生物学实验技术双语教程》和《微生物学实验》